服務介紹
免疫熒光細胞化學是根據抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物,再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有熒光素,利用熒光顯微鏡觀察標本,熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光(黃綠色或桔紅色),可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質、定位,以及利用定量技術測定含量。
實驗原理及流程
將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應的抗原(或抗體)結合后,在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。
實驗流程
免疫熒光單標記方法
免疫熒光單標記是指只標記一種蛋白質分子,方法比較簡單,只要按照染色步驟去做,通常不存在太多的問題。但要注意固定液的選擇,固定液選擇的合適與否,可能會直接影響染色結果。
免疫熒光雙標記方法
免疫熒光的雙標記是指同時標記細胞內兩種蛋白質分子,當懷疑某種配體與已知受體結合后可用此方法加以證明。此方法稍微復雜一些,應注意所用的一抗是來自不同種屬動物的兩種特異性抗體(例如:A抗體為多克隆抗體,來自家兔;B抗體為單克隆抗體,來自小鼠)。其次,兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應重疊,且盡量遠離,通常可以選擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5,或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下,染色時兩種一抗可以同時孵育,然后可以同時孵育兩種二抗。但當染色結果一種顏色非常弱,而另一種顏色比較強時,應考慮先孵育顏色較弱的二抗。其他步驟同免疫熒光單標記。
客戶提供
細胞株;細胞爬片;組織切片,一抗
公司提供
基本實驗步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析;
熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡拍攝。
實驗周期:1-3周
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15021202164
上海市楊浦區(qū)國康路100號2層
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