一、人淋巴懸浮細胞轉(zhuǎn)染試劑（Zeta Life）產(chǎn)品介紹

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細胞、活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑，此技術(shù)成為新的蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。

二、產(chǎn)品應(yīng)用

各種細胞類型中高的轉(zhuǎn)染效率。

可用于多種真核細胞系的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染和共轉(zhuǎn)染；

可用于各種原代細胞的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染；

可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細胞、懸浮細胞，如:T細胞、NK細胞、人淋巴細胞、THP-1等；

可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動物細胞。

三、產(chǎn)品說明

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、包裝規(guī)格

貨號：AD600075

規(guī)格：0.75ml

3、儲存條件

常溫運輸，4℃保存，可保存兩年，拒絕反復(fù)凍融。

四、使用說明

1、材料準備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素 ）

2、操作步驟

提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右，再進行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時后對細胞進行正常換液，懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若 進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。

轉(zhuǎn)染操作示意圖：

轉(zhuǎn)染實驗推薦用量

五、優(yōu)秀表現(xiàn)

Zeta Life多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑的尺寸大小是傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑體積的1/10;

本轉(zhuǎn)染試劑是通過細胞內(nèi)?和細胞主動吸收進入細胞；

本轉(zhuǎn)染試劑進入后對細胞膜無物理性損傷，不易出現(xiàn)細胞變形，保持高的細胞活力；

不激活細胞表面或細胞體內(nèi)marker;

可反映真實的細胞通路蛋白原始數(shù)據(jù)；

可轉(zhuǎn)染免疫細胞、懸浮細胞等。

效果對比圖，Zeta Life轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率高于Lipo3000、Lipo2000

六、注意事項

1、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會下降 80%左右，甚至會轉(zhuǎn)染失敗。

2、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素，內(nèi)毒素對細胞將產(chǎn)生很大的細胞毒性，會導致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左 右，甚至導致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒）。

3、復(fù)合物的制備過程中是絕對不能用其他任何試劑對核酸或轉(zhuǎn)染試劑進行稀釋，只需將核酸和轉(zhuǎn)染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合，如果進行了稀釋會導致轉(zhuǎn)染失。

4、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細胞培養(yǎng)板。

5、轉(zhuǎn)染 24 小時后進行正常換液，不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時后換液。

6、原代細胞、免疫細胞轉(zhuǎn)染時，細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基。

七、成功轉(zhuǎn)染案例圖賞

1、NK細胞

2、RAW264.7細胞

3、人淋巴 懸浮細胞

4、A549細胞

5、N2a/Neuro-2a小鼠神經(jīng)瘤母細胞

6、H9C2大鼠心肌細胞

Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑系列：

品牌：美國Zeta Life 貨號：AD600025 （Zeta Life原代細胞轉(zhuǎn)染試劑）0.25ml

品牌：美國Zeta Life 貨號：AD600050 （Zeta Life真核細胞轉(zhuǎn)染試劑）0.5ml

品牌：美國Zeta Life 貨號：AD600075 （Zeta Life可代謝轉(zhuǎn)染試劑）0.75ml

品牌：美國Zeta Life 貨號：AD600150 （Zeta Life免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑）1.5ml

品牌：美國Zeta Life 貨號：AD600500 （Zeta Life懸浮細胞轉(zhuǎn)染試劑）5ml

品牌：美國Zeta Life 貨號：AD601000 （Zeta LifeRAW264.7細胞轉(zhuǎn)染試劑）10ml

人淋巴懸浮細胞轉(zhuǎn)染試劑（Zeta Life）

Zeta Life介紹：

美國 Zeta Life 公司成立于 1989 年，是國際無血清細胞培養(yǎng)基 DMEM/F12 主要完成人，有三十多年的胎牛血清、無血清細胞培養(yǎng)基、以及干細胞、免疫細胞及腫瘤細胞等多種不同類型哺乳動物細胞的無血清培養(yǎng)液生產(chǎn)經(jīng)驗；也是目前世界胎牛血清、無血清培養(yǎng)基最大的 OEM 供應(yīng)商之一；每批血清均有完整的血源證明文件、獸醫(yī)師檢驗證明及品質(zhì)測試報告；ZETA LIFE 血清在 100 級的無菌間采用全自動方式制造生產(chǎn)，具有良好的可再現(xiàn)性及可追溯性。 2018 年 Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細胞、活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑，此技術(shù)成為新的蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。