蛋白質(zhì)是細(xì)胞活性和功能的執(zhí)行者,且蛋白質(zhì)是依靠蛋白間相互作用執(zhí)行功能的,因而研究蛋白的相互作用對于研究細(xì)胞活性和功能、解釋生命過程和現(xiàn)象具有重要意義。
實(shí)驗(yàn)原理
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)是研究蛋白-蛋白間相互作用的經(jīng)典方法,屬于免疫沉淀技術(shù)的一類,常被用于鑒定特定蛋白復(fù)合物的中未知蛋白組分。免疫共沉淀的設(shè)計(jì)理念是,假設(shè)一種已知蛋白是某個(gè)大的蛋白復(fù)合物的組成成員,那么利用這種蛋白的特異性抗體,就可能將整個(gè)蛋白復(fù)合物從溶液中“拉"下來(常說的“pull-down"),進(jìn)而可以用于鑒定這個(gè)蛋白復(fù)合物中的其他未知成員。免疫共沉淀的特點(diǎn)可以概括為兩點(diǎn),是天然狀態(tài),第二是蛋白復(fù)合物。
實(shí)驗(yàn)方法
1. 預(yù)清洗beads。
2. 取蛋白樣品分成input,igG組和目標(biāo)抗體組進(jìn)行IP。
3. 取出預(yù)清洗的beads. 加入 IP用的目標(biāo)抗體和igG在rotator進(jìn)行IP反應(yīng)過夜。
4. IP過夜后收取蛋白
5. 通過SDS-PAGE和Western Blot或質(zhì)譜進(jìn)行檢測。
結(jié)果展示
實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
1. 實(shí)驗(yàn)周期:3-5周
2. 交付標(biāo)準(zhǔn):完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告(試劑、耗材、實(shí)驗(yàn)步驟)、原始數(shù)據(jù)等
需確認(rèn)信息
1. 目的蛋白及信息
2. 樣本種屬及類型
3.是否提供一抗
15021202164
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